Hotstart FlashPfu Master Mix(quick load)
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产品信息:
名称
货号
规格
目录价
Hotstart FlashPfu Master Mix(quick load),2X
TG003-A
100rxns
268
TG003-B
500rxns
1128
TG003-C
5000rxns
9198
备注:定制规格大于规格C 5倍起接受定制
产品描述: 本品是采用化学修饰的基因工程改造来源超嗜热古菌的pfu聚合酶,该酶具有5‘-3’聚合酶活性,3‘-5’核酸外切酶活性,本品在常温下酶的活性被完全封闭,使得该酶在低温或常温下没有活性,从而有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增,酶的激活须在95℃下孵育10分钟。FlashPfu DNA聚合酶最快延伸速率可以到6kb/min,结合精心优化调制的反应buffer,使得Mix可以实现对各种复杂模板的有效扩增(如GC含量大于70%的模板,基因组模板,大片段模板,以及纯净度不高的模板)且带颜色指示支持直接上样
产品特点:
更好的特异性: Hotstart FlashPfu DNA聚合酶封闭了聚合酶活性,可以确保在常温下不会发生非特异的扩增延伸,从而降低体系的特异性
超快延伸速度:酶延伸速率可到6kb/min,复杂模板可到2kb/min。
超高保真性: 保真性可达野生Taq酶的50倍。
超长片段扩增:λDNA轻松扩增至30kb,基因组DNA可扩至19kb。
广泛的GC适用性:高效扩增高GC片段。
使用简便:即用型的预混液,含颜色指示剂,PCR结束后无需添加Loading可直接电泳
使用方法:
- 按照下表配置反应Mix(以20µL反应体系为例)。
试剂
体积
终浓度
Flash Pfu Master Mix 2×
10µL
1×
上游引物(浓度10µM)1
0.4-1µL
0.2-0.5µM1
下游引物(浓度10µM)1
0.4-1µL
0.2-0.5µM1
DNA模板
1-5µL
N/A
PCR增强剂 100× 2
0.2-1µL
1×-5×2
工艺用水
Up to 20µL
N/A
注: 1可根据实际情况调整引物终浓度。
2本品中额外增加PCR增强剂,遇高GC片段,可使用终浓度1×-5×PCR增强剂,提高扩增效率。
- 设置反应程序
温度
时间
循环
预变性:98℃
8-10min
1
变性: 98℃
10s
25-35
退火:60℃1
10-30s
延伸:72℃2
15-30s/kb
终延伸:72℃1
5-10min
1
注: 1如果用户设计的引物退火温度在68℃以上,可直接使用2步法,在72℃退火延伸即可。如果引物退火温度在65℃一下,可使用三步法,TM-2℃/TM-5℃进行退火,72℃延伸
2延伸时间:当PCR产物大于1kb时,简单模板延伸时间15s/kb。复杂模板如基因组/高GC/二级结构多的建议延伸时间30s/kb。
3 上机检测
反应体系配置完成后,混匀离心,上机检测,分析结果。
注意事项:
本品仅用于科研。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品。
请穿实验服并戴一次性手套操作,以防影响人体健康。
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货号TG003;详见产品详情